Page 4 - E-Tez Bülteni Eylül 2025, SAYI 3
P. 4
DOKTORA TEZİ
Biyoteknoloji Anabilim Dalı
Geobacillus stearothermophilus Triaçilgliserol Lipazının
(GstLipC) Katalitik Etkinliğinin Arttırılması ile Biyolojik
İndikatörün İyileştirilmesi
Arife KAÇIRAN
Tez Danışmanı: Prof. Dr. Ali Osman BELDÜZ
Tez Özeti
Geobacillus stearothermophilus sporları, yüksek sıcaklığa karşı dirençli olup, sterilizasyon süreçlerinde biyoindikatör olarak
kullanılmaktadır. Söz konusu sporların çimlenmesi, enzimlerin sıralı aktivasyonu ile ilerleyen yüksek derecede düzenlenmiş bir
biyolojik süreçtir ve bu süreçte çeşitli proteinlerin önemli işlevler üstlendiği bilinmektedir. Bu çalışmada, Geobacillus
stearothermophilus’ta bulunan ve spor germinasyon sürecinde kritik role sahip olan GDSL ailesi lipazının karakterizasyonu
gerçekleştirildi. Elde edilen bu enzim üzerinde biyoinformatik çalışmalar ile dört farklı mutasyon çalışması yapıldı ve yaban tip
GDSL lipazı ile kıyaslandı. Mutant enzimler pNW33N plazmitine klonlanarak Geobacillus stearothermophilus’a transformasyonu
gerçekleştirildi. Devamında yaban tip ve rekombinant plazmiti bulunduran Geobacillus stearothermophilus için sporulasyon ve
germinasyon çalışmaları gerçekleştirildi. Germinasyon kinetiği, OD600 absorbans değişimi üzerinden spektrofotometrik olarak
değerlendirildi. Elde edilen bulgular, hem yaban tip hem de mutant GDSL lipazların karakterize edildiğini ve mutasyonların
enzimin Km değerinde anlamlı değişimlere yol açtığını gösterdi. Ayrıca, yaban tip ve mutant sporların germinasyon süreçleri
arasında belirgin farklılıklar gözlemlendi.
Anahtar kelimeler: Geobacillus stearothermophilus, sporulasyon, germinasyon, GDSL lipazı